植物生理学实验-叶绿素a b测定 中考句子赏析的技巧

叶绿素a,b含量测定[实验目的]熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。

[实验原理]在叶绿素a和b的吸收光谱曲线中,红波波长范围内,叶绿素a的最大吸收峰在663nm,叶绿素b的最大吸收峰在645nm。 吸收曲线彼此又有重叠。

根据Lambert—Beer定律,最大吸收峰不同的两个组分的混合液,它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系:OD1=Ca·ka1+Cb·kb1(1)OD2=Ca·ka2+Cb·kb2(2)Ca为组分a的浓度(g/L)Cb为组分b的浓度(g/L)OD1为在波长λ1(即组分a的最大吸收峰波长)时,混合液的光密度OD值。 OD2为在波长λ2(即组分b的最大吸收缝波长)时,混合液的光密度OD值。 ka1,kb1,ka2,kb2分别为组分a,b的比吸收系数,即组分a(b)的浓度为(1g/L)时,其在相应波长(λ1,λ2)时的光密度OD值。 叶绿素A和B的80%丙酮溶液,当浓度为1时,比吸收系数K值如下表:将表中数值代入上式(1),(2)并整理的:Ca==若把Ca,Cb的浓度单位从原来的g/L改为mg/L,则上式可改写为下列形式:Ca=(3)Cb=(4)Ct=Ca+Cb=+(5)Ct为叶绿素总浓度,单位为g/L。 利用(3),(4),(5)式即可计算出叶绿素A和B及总叶绿素的浓度(g/L)。 [器材与试剂]1.实验仪器:高级型分光光度计,离心机,台天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管2.实验试剂:丙酮,碳酸钙3.实验材料:植物叶片[实验步骤]1.色素的提取:取新鲜叶片,剪去粗大的叶脉并剪成碎块,称取放入研钵中加纯丙酮5ML,少许碳酸钙和石英砂,研磨成匀浆,再加80%丙酮5ML,将匀浆转入离心管,并用适量80%丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上清液用80%丙酮定容至20ML。

2.测定光密度:取上述色素提取液1ml,加80%丙酮4ml稀释和转入比色杯中,以80%丙酮为对照,分别测定663nm,645nm处的光密度值。

3.按公式分别计算色素提取液中叶绿素A,B及叶绿素总浓度。 再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。

[注意事项]1.由于植物子叶中含有水分,故先用纯丙酮进行提取,以色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。

2.由于叶绿素A,B的吸收峰很陡,仪器波长稍有偏差,就会使结果产生很大的误差,因此最好能用波长较正确的高级型分光光度计。

[实验作业]1.试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素A和叶绿素B的比值有无不同。 2.分光光度法和比色法有何不同?3.叶绿素A和叶绿素B在红光区和蓝光区都有最大吸收峰,能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿素A和叶绿素B的定量分析,为什么?。

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